介绍
细胞疗法中因为新鲜细胞制剂产品时间和资源要求较高,因此制剂的冻存保护方法被较高频率应用,但需要加强相关冻存保护的监管活动,其中冻存液应用辅料材料的质量和安全性一直是制剂冻存保护的关注领域之一,其目的是希望利用优化的冻存液功能,在不需要清洗步骤的前提下安全地注入人体。
美国BioLife Solutions 公司的HypoThermosol HTS-FRS和CryoStor系列冻存液产品在世界500多个IND中被引用,并已在相关实际临床环境中被使用,但支持这些研究的临床前数据的获取通常是保密性质,较难获得二手数据,其主要原因是因为这些研究成本高昂,其结果也为客户提供了较大的竞争优势,然而由于这些研究结果的重要程度,需进行一手的研究来控制相关程序以及确保客观的结果审查。
针对国内用户对于Biolife冻存液回输人体应用相关的顾虑,今天小编带来这篇研究目的是收集和提供更多的冻存液作为辅料应用的相关定量数据,以便提出和解决当前和未来与系统性给药安全性相关的一系列问题。
研究方法
本研究分为三个阶段,以评估静脉注射Biolife两款冻存液HypoThermosol HTS- frs (HTS)和CryoStor(分别为含有O%、5%或10% DMSO的CSB、CS5和CS10)到6-8周龄雄性C57BI/6小鼠(每5个一组)体内的安全性(表I)。
第一阶段zhi接冻存液注射:旨在评估冻存液体积和溶液组成的影响;注射250uL和500uL的HTS、CryoStor或对照溶液。对照组为PBS或FHCRC标准冷冻培养基。
第二阶段冻存液+新鲜细胞注射:评估了注射2000万新鲜人脐带血(UCB)细胞悬浮在测试溶液中的安全性。
第三阶段冻存液+冻存细胞解冻后注射:将UCB细胞在测试溶液中冷冻保存,解冻后不清洗直接注射小鼠体内。
为了评估潜在的毒性,在注射前1天(参照组)、注射后30分钟、24小时和7天的尸检中对采集的样本进行了全血计数,且收集器官标本,进行组织病理学检查。
表1-试验组的分期概况
研究结果
阶段一结果:zhi接冻存液注射
输注后30分钟、24小时和7天的血液计数表示为参照组的百分比(由虚线表示),以便所有数据都能以相同的刻度表示。
在每个时间点内,单独注射溶液导致各组之间的血液计数相似。在各组中,注射后30分钟观察到嗜神经细胞计数立即出现峰值,然而这些是24小时后的常态化。7天后,血小板、中性粒细胞和网织红细胞略有升高。500μl CS5组在输注时观察到一例si亡,但Zui终被认定为与溶液组成无关。
阶段二结果:冻存液+新鲜细胞注射
添加新鲜的人脐带血干细胞产生的细胞计数与单独的Vehicle溶液相似。随访7天,动物无si亡,体重也有所增加。同样在各组中,嗜神经细胞计数在注射后30分钟即出现峰值,并在24小时后恢复正常。7天后,血小板、中性粒细胞和网织红细胞略有升高。
阶段三结果:冻存液+冻存细胞解冻后注射
III期评估了冷冻和解冻的人脐带血干细胞免洗zhi接输注的安全性。将20 × 106个细胞在500μl中冷冻,或在HypoThermosol (HTS)中的相同密度的细胞在4℃下保存过夜,各溶液采取冷注入形式(4°C)。同样在每个输注后时间,各组之间的血液计数相似,没有si亡,各动物在7天的随访中体重有所增加。同样,在所有组中嗜神经细胞计数在注射后30分钟立即出现峰值,并在24小时后恢复正常。7天后仅网织红细胞略有升高。
研究结论
· 仅一例观察到的si亡与溶液成分无关
· 动物在7天的随访中体重增加
· shi检显示各器官正常
· 在输注后时间点内各组之间的血液计数相似
· 在shi检时血小板,中性粒细胞和网织红细胞计数略有升高
上述研究初步证明了Biolife品牌即用型、无血清和无蛋白的HypoThermosol和CryoStor溶液可作为细胞疗法中zhi接回输的辅料用途,该发现支持进一步的临床研究。
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CryoStor 冻存液系列
-80°C至-196°C细胞组织用冻存液
HypoThermosol FRS系列
2°C至8°C
低温储存和运输介质
